As aplicações da reação em cadeia pela polimerase (Nested PCR) foram avaliadas em comparação com a pesquisa de anticorpos e isolamento bacteriano, para o diagnóstico de casos fatais com suspeita de riquetsioses do grupo da febre maculosa (GFM) em amostras de soro. A PCR foi baseada na especificidade dos iniciadores derivados de uma região gênica conservada, que codifica um antígeno de 17-kDa (htrA). Amostras de soro de 50 casos fatais suspeitos de riquetsioses do GFM foram testadas através da imunofluorescência indireta (IFI) para pesquisa de IgG e IgM e Nested PCR, após extração do DNA, com kit específico para extração de soro. O isolamento bacteriano foi realizado quando foram encaminhadas amostras adequadas para o exame. O fragmento específico de riquétsias GFM foi detectado em 40% (20/50) dos soros testados em comparação com 22% (11/50) detectados pelos métodos sorologia e isolamento bacteriano. Os produtos amplificados foram confirmados pela análise do sequenciamento de fragmentos de DNA apresentando 100% de identidade com R. rickettsii e com grupo da febre maculosa. Os resultados obtidos indicam que a utilização da Nested PCR em amostras de soro aumenta a sensibilidade para o diagnóstico da FM em casos fatais com suspeita clínica da doença, sendo indicada sua aplicação em complemento à sorologia e ao isolamento.

Suporte financeiro: Instituto Adolfo Lutz

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Brazilian Spotted Fever: Comparative evaluation of Indirect Immunofluorescence assay (IFA) and Polymerase Chain Reaction (PCR) methodology in human serum samples from endemic areas of São Paulo State.

Elvira Maria Mendes do Nascimento, Luiz Jacintho da Silva, São Paulo, Brasil, 2010 [Doutorado – Área de Concentração: Pesquisas Laboratoriais em Saúde Pública - Programa de Pós Graduação em Ciências da Coordenadoria de Controle de Doenças da Secretaria de Estado da Saúde de São Paulo]

The application of polymerase chain reaction (Nested PCR) assay has been evaluated in comparison with antibody research and bacterial isolation for the diagnosis of fatal cases of spotted fever group rickettsiosis in serum samples. PCR was based on specific primers derived from the conserved 17kDa common antigen gene (htrA). Serum samples of 50 fatal cases suspected of spotted fever group rickettsiosis infection were tested by antiboby IgG and IgM (IFA) and Nested PCR after DNA extraction with kit to specific serum DNA extraction.  Bacterial isolation was carried out and the suitable samples were sent for diagnosis. The SFG rickettsia-specific DNA fragment was detected in 40%(20/50) of the tested sera, compared to 22% (11/50) serum samples that were positive by serology and  bacterial isolation. PCR amplicons were sequenced using DNA fragments and confirmed a 100% identity with Rickettsia rickettsii and spotted fever group rickettsiosis. Results obtained indicate that Nested PCR assay in serum samples increased spotted fever diagnosis sensibility in the fatal cases with clinical suspicion thus being recommended as a complementary methodology to serology and isolation.