Para que o controle da raiva seja eficiente, é necessário conhecer as linhagens do vírus da raiva (RABV) nas diferentes regiões geográficas e associá-las aos vetores encontrados na mesma área. A associação das sequências de nucleotídeos (nt), ou de aminoácidos (aa) deduzidos das sequências de nt, possibilita determinar a origem de uma variante viral e sua dinâmica no ecossistema. Este trabalho analisou 149 sequências dos genes N e G do RABV isoladas de bovinos, normalmente transmitidos pelo morcego hematófago Desmodus rotundus. O gene N possui 1.350 nt e a proteína N possui 450 aa; o gene G possui 1.572 nt e a glicoproteína G, 524 aa. As amostras do RABV foram isoladas em três áreas epizoóticas do Estado de São Paulo, entre os anos de 1997 e 2002. Essas três áreas são designadas como Área I (Vale do Paraíba), Área II (região de Campinas) e Área III (região de São João da Boa Vista). O ápice dessas epizootias ocorreu entre os anos de 1997-1999, 1998-2000 e 2000-2002, nas Áreas I, II e III, respectivamente. O principal objetivo deste trabalho foi associar as três áreas epizoóticas para determinar a relação entre elas, como também caracterizar geneticamente as sequências geradas a partir das amostras do RABV. As sequências dos gene N e G foram alinhadas separadamente, com sequências de referência, utilizando o programa Clustal W e editadas manualmente no BioEdit. A construção das árvores filogenéticas foi realizada pelo método Neighbor-Joining e a confiabilidade estatística das árvores foram avaliadas pelo método bootstrap. As árvores filogenéticas N e G puderam ser divididas em dois clados principais, um deles agrupando amostras da Área I e outro agrupando amostras das Áreas II e III, demonstrando que a epizootia da Área I não tem relação com as Áreas II e III. Ainda, como a epizootia da Área III ocorreu após a da Área II, conclui-se que a primeira é consequência da segunda. Interessante é o fato de que, apesar das diferenças de nt entre as sequências das Áreas I e II-III, a diferença de aa foi pequena, demonstrando não haver seleção positiva. Esse fato deve estar relacionado com a forma pela qual os vetores (D. rotundus) infectados se deslocam no espaço geográfico. Algumas assinaturas genéticas relacionadas a áreas polimórficas dos genes N e G foram encontradas nas sequências da Área I, como também algumas em comum com as Áreas II e III.

Suporte Financeiro: Coordenadoria de Controle de Doenças da Secretaria de Estado da Saúde de São Paulo

Genetic characterization of the rabies virus isolated from bovines during the period from 1999-2001 in an epizootic area in the State of São Paulo

In order to render efficiency to rabies control, it is necessary to know the lineages of the rabies virus (RABV) in the different geographic regions and to associate them to the vectors found in the same area. The association of nucleotide sequences (nt) or amino-acids (aa) deduced from the nt sequences renders possible to determinate the origin of a viral variant and its dynamic in the ecosystem. This paper analyzed 149 sequences of the N and G genes of the RABV isolated from bovines, regularly transmitted by the hematophagous bat Desmodus rotundus. The N gene contains 1.350 nt and the protein N contains 450 aa, the gene G contains 1.572 nt and the glycoprotein G, 524 aa. Samples of RABV were isolated in three epizootic areas of the State of São Paulo, during the period comprised from 1997 to 2002. These three areas are designated as Area I (Paraiba Valley), Area II (the region of Campinas) and Area III (the region of São João da Boa Vista). The apex of these epizooties occurred during the years of 199701999, 1998-2000 and 2000-2002, in the Areas I, II and III respectively. The main objective of this paper is to associate the three epizootic areas in order to determinate the relationship between them, as well as genetically characterize the sequences generated from the RABV samples. Sequences from the genes N and G were separately aligned, with reference sequences, employing the Clustal W program, and manually edited in BioEdit. The construction of phylogenetic trees was performed by the Neighbor-Joining method and the statistic trust of the trees was evaluated by the bootstrap method. Phylogenetic trees N and G were divided in two major clades, one grouping the samples from Area I and the other grouping samples from Areas II and III, showing that the epizooty of Area I is not related to Areas II and III. Even more, since the epizooty registered in Area III occurred after the one occurring in Area II, it is possible to conclude that the first is a consequence of the second. It is interesting to note that, regardless of the nt differences in the sequences from areas I, II and III, the aa difference was small, showing there is no positive selection. Such aspect must be related to the way by which the infected vectors (D. rotundus) dislocate in the geographic space. Some genetic signatures related to polymorphic areas of genes N and G were found in the sequences of Area I, as well as some in common with the Areas II and III

Financial Support: Disease Control Coordination of the State Secretary of Health of São Paulo 

Correspondência/Correspondence to:
Pedro Carnieli Jr. 
Av. Paulista, 393 
CEP: 01311-001– São Paulo/SP – Brasil
pecarniel@yahoo.com.br 

Este estudo avaliou aspectos da resposta imune protetora desencadeada por proteínas excretadas/secretadas (ESAs) de Toxoplasma gondii. A escolha do antígeno baseou-se na forma evolutiva do protozoário, uma vez que taquizoítos são responsáveis pela estimulação da resposta  imunocelular e humoral nos hospedeiros intermediários. As ESAs foram obtidas de sobrenadantes de culturas células VERO infectadas com taquizoítos da cepa RH, após 48 horas de infecção. Grupos de cinco camundongos fêmeas da linhagem A/Sn foram imunizados, por via intraperitonial, com quatro doses quinzenais de 20µg de ESAs e 5µg de hidróxido de alumínio como adjuvante. Os grupos controle receberam nas mesmas datas somente o adjuvante dissolvido em 200µl de PBS. Um pool de soros de animais cronicamente infectados foi utilizado como controle positivo. Coletas de sangue foram realizadas 15 dias após cada imunização e a análise dos anticorpos foi feita por Elisa, RIFI e Imunobloting. A capacidade de interação dos anticorpos anti-ESAs com outros mecanismos da resposta imune foi avaliada por lise mediada por complemento, teste de aglutinação e Antibody-mediated celular toxicity. Após 15 dias da última imunização, ambos os grupos de animais foram desafiados com 10³ taquizoítos da cepa RH. A parasitemia, determinada pela PCR, e os índices de sobrevida foram monitorados diariamente. Os resultados demonstraram que os títulos dos anticorpos anti-ESAs foram crescentes a cada imunização. Reconheceram um lisado bruto de taquizoítos e ligaram-se ao redor de toda membrana de taquizoítos, porém, mais especificamente na região apical. Foram capazes de aglutinar taquizoítos, interagir com proteínas do sistema de complemento e com células esplênicas para lisar taquizoítos in vitro. Mesmo desafiando os camundongos com uma dose letal de uma cepa altamente virulenta, os resultados da PCR sugeriram que os animais imunizados apresentaram menor parasitemia quando comparados aos do grupo controle. Consequentemente, o mesmo aconteceu com os índices de sobrevida, em que os imunizados sobreviveram 48 horas a mais do que os animais controle. Esses dados sugerem a capacidade das ESAs em estimular a resposta imune protetora em camundongos isogênicos.

Suporte Financeiro: Coordenadoria de Controle de Doenças da Secretaria de Estado da Saúde de São Paulo CCD-SES/SP e Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (Fapesp)

Analysis of the antigenic potential of proteins excreted by taquizoits of Toxoplasma gondii

This study evaluates aspects of the immune protective answer ensued by proteins excreted/secreted (ESAs) from Toxoplasma gondii. The antigen choice was based on the evolutionary form of the protozoa, since taquizotes are responsible for the stimulation of the immune cellular and humoral response in intermediate hosts. ESAs were obtained from floating from cell culture VERO infected with taquizotes of the RH strain, 48 hours after infection. Female mice from the A/Sn lineage were grouped in five and immunized by intraperitoneal via, with four doses of 20 µg ESAs and 5 µg of aluminum hydroxide, as an adjuvant, every fifteen days. Control groups received in the same dates only the adjuvant dissolved in 200 µl  PBS. A pool of chronically infested animal sera was employed as positive control. Blood collections were performed 15 days after each immunization and the analysis of antibodies was performed by Elisa, RIFI and Imunobloting. Antibody anti-ESA interaction ability to other mechanisms of immune response was evaluated by lise mediated by complement, agglutination test and  Antibody-mediated celular toxicity. Fifteen days after the last immunization, both animal groups were challenged with 10³ taquizotes of the RH strain. Parasitemy, as determined bu PCR and survival rates were daily monitored. Results show that anti-ESA antibody titers grew at each immunization. They recognized a gross taquizote lise and linked themselves around the whole taquizote membrane, specifically in the apex region. They were able to agglutinate taquizotes, interact to proteins in the complement system and with spleen cells to lise in vitro taquizotes. Even challenging the mice with a lethal dose of an extremely virulent strain, results from the PCR suggested that immunized animals presented lower parasitemy when compared to those in the control group. As a consequence, the same happened to survival rates, in which immunized animals survival for 48 hours more than control animals. These data suggest the ability of ESAs to stimulate immune protective response in isogenic mice.

Financial Support: Disease Control Coordination of the State Secretary of Health of São Paulo CCD-SES/SP and Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (Fapesp)

Correspondência/Correspondence to:
Thaís Alves da Costa Silva
Av. Dr. Arnaldo, 351
CEP: 01246-000 – São Paulo/SP – Brasil
Tel: 55 11 3068-1991
 tha_isbio@hotmail.com

O Sistema Único de Saúde é formado por um corpo de trabalhadores com formação diferenciada, mas espera-se deles um perfil comprometido com as diretrizes do SUS, o que exige investir em educação continuada voltada para a aquisição de valores e atitudes, conhecimentos e habilidades. Em várias ações educativas esses trabalhadores participam com o objetivo duplo de aprender e, depois, multiplicar os conteúdos abordados. A literatura mostra que educar exige competências pedagógicas próprias para obter os resultados esperados, principalmente quanto a atitudes. Adotou-se para este estudo a formação de multiplicadores para o Curso Introdutório para Profissionais da Saúde da Família no Estado de São Paulo, em 2006. Investigar as dificuldades sentidas, as competências e necessidades de formação percebidas por esses atores e identificar diferenças e semelhanças com os pressupostos da Política Nacional de Educação Permanente em Saúde permite mapear e delinear como profissionais de saúde tornam-se docentes. Foram entrevistados alunos e coordenadores dos cursos de três regiões do Estado de São Paulo. Buscou-se inserir os entrevistados no contexto de sua trajetória pessoal e inserção atual no serviço. A maior experiência no SUS e, especificamente, em educação se traduziu na familiaridade com os termos utilizados, na sintonia das respostas e aproximou parte dos alunos com o grupo de coordenadores. Esse grupo percebeu uma insuficiência de conteúdos pedagógicos, enquanto o grupo de profissionais com inserção mais recente aproveitou mais os conteúdos teóricos, e não percebeu tanto a abordagem de questões pedagógicas. Perfil pessoal e inserção profissional confundem-se nas competências necessárias, apontando que na saúde, como na educação, multiplicadores não se criam com um curso teórico sobre o assunto a ser ensinado, mas num processo mais longo de formação, em sucessivas aproximações do saber ensinar, até que o profissional de saúde possa também ser um bom professor.

Suporte financeiro: Coordenadoria de Controle de Doenças da Secretaria de Estado da Saúde de São Paulo

Capacitating docents in health services of the State of São Paulo

The Unified Health System in integrated by a number of workers with different graduations, but expected to exhibit a profiled engaged to the System guidelines, therefore demanding continuing education investments regarding the strengthening of values and attitudes, knowledge and abilities. In diverse educative actions, these workers participate with the double objective to learn, first, and, then, to multiply the contents. Literature shows that education demands specific pedagogic competencies in order to obtain the expected results, mainly regarding attitudes. In this study, we adopted the process to capacitate multipliers to the Introductory Course for Family Health Professionals in the State of São Paulo, in 2006. Investigating difficulties identified, competences and needs perceived by these actors and identifying differences and similarities with the guidelines of the National Permanent Health Education Policy allows us to map and trace the way by which health professionals become docents. We interviewed pupils and coordinator of courses from three regions of the State of São Paulo. We tried to insert the interviewers in the context of their personal trajectory and present insertion in their work. Higher experience in the SUS and, specifically, in education was translated by higher familiarity with the vocabulary employed, tuning in the answers and approximated some of the pupils to the coordination group. This group perceived insufficiency in pedagogic contents, while the group of professionals more recently inserted in the service profited more from the theory content and did not perceive as clearly the approach of pedagogic subjects. Personal profile and professional insertion are confounded in the necessary competencies. Showing that in health, as well as in education, multipliers are not created with a theoretical course on the subject to be taught, but in a longer process of formation, in successive approaches from the ability to teach until the health professional can also become a good teacher.

Correspondência/Correspondence to:
Maria Teresa Surányi de Andrade
R. Renato Paes de Barros, 77
São Paulo/SP – Brasil
Tel.: 55 11 3078-2442
mtsandrade@prefeitura.sp.gov.br